活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）檢測試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

  活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）檢測試劑是一種旨在通過(guò)腦磷脂和鞣花酸反應物，與血漿樣品混合后，加入鈣離子啟動(dòng)凝血反應，產(chǎn)生凝塊，通過(guò)目測或凝血儀檢測，來(lái)測定樣品中凝塊形成時(shí)間的*而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗證明的。其適用于各種動(dòng)物和人體血漿樣品凝血系統的檢測，以及凝血因子和抑制劑的的篩選。產(chǎn)品嚴格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩定。

技術(shù)背景

活化部分凝血活酶時(shí)間（activated partial thromboplastin time；APTT），又稱(chēng)為白陶土腦磷脂凝血時(shí)間（kaolin cephalin clotting time；KCCT），是指血漿在腦磷脂（缺乏組織因子的部分凝血活酶）、接觸因子激活劑和鈣離子等的參與下，形成纖維蛋白凝塊（fibrin clot）所需的時(shí)間長(cháng)度。其反映和檢測血液系統內源性（intrinsic）又稱(chēng)為接觸性激活通路（contact activation pathway）和常見(jiàn)（common）凝血通路或機制的生理或病理狀況。內源性凝血通路或機制由凝血因子 8、9、11、12、前激肽釋放酶（prekallikrein）、高分子激肽原（high molecular weight kininogen；HMWK）等構成；而常見(jiàn)通路由凝血因子1、2、5、10等組成。正常活化部分凝血活酶時(shí)間通常為25至40秒。活化部分凝血活酶時(shí)間用于篩選出血傾向的病人，即內源性凝血系統異常的病人；定量檢測凝血因子2、5、8、9、10、11、12等差異和缺陷；檢測血液病理性凝血抑制劑，例如狼瘡抗凝物（lupus anticoagulant；LA）；監測肝素抗凝血療法和凝血因子替代療法。維生素K缺乏、彌散性血管內凝血（disseminated intravascular coagulation；DIC）、血管性血友?。?/span>Von Willebrand disease）、血友?。?/span>haemophilia）、遺傳性無(wú)纖維蛋白原血癥（congenital afibrinogenemia）、凝血因子缺陷、肝素、狼瘡抗凝物等導致活化部分凝血活酶時(shí)間延長(cháng)；而血栓性疾病則引起活化部分凝血活酶時(shí)間縮短。其檢測方法在于使用血小板不足的血漿，血小板替代物磷脂（來(lái)自于兔腦、牛腦、大豆或腦磷脂等），接觸因子激活劑包括白陶土（kaolin）、硅藻土（celite）、二氧化硅微粒（micronized silica），或鞣花酸（ellagic acid）等，混合在一起，加入鈣離子后啟動(dòng)凝血反應。

產(chǎn)品內容

  抗凝液（Reagent A）        毫升

  反應液（Reagent B）          毫升

  催化液（Reagent C）          毫升

  標準液（Reagent D）          微升（另購）

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)              1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；有效保證3月；  反應液（Reagent B）一旦啟用，有效保證1周

用戶(hù)自備

2毫升離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品反應的容器

微型臺式離心機：用于樣品操作

培養箱或恒溫水槽：用于反應物孵育

計時(shí)器：用于反應計時(shí)

比色皿：用于樣品凝血儀測定的容器

凝血儀：用于樣品凝塊形成分析

實(shí)驗步驟

一、 血漿制備

1． 準備好2毫升離心管

2． 加入xx微升  抗凝液（Reagent A） 

3． 抽取1.8毫升血液到含  抗凝液（Reagent A）的離心管

4． 放進(jìn)微型臺式離心機離心10分鐘，速度為3000g 

5． 小心移取上層黃色液體到新的2毫升離心管――此為血漿成分（注意：避免觸碰白色液體層）

6． 即刻置于冰槽里備用（注意：2小時(shí)內使用）

二、 測定準備

1． 準備好上述制備的血漿樣品

2． 設定好凝血儀并預熱

3．   催化液（Reagent C）置于37℃恒溫水槽均衡溫度

三、 凝血測定（手工操作）

1． 準備好1個(gè)1.5毫升離心管

2． 移取xx微升  反應液（Reagent B）

3． 放進(jìn)37℃培養箱里孵育1分鐘

4． 加入100微升上述制備的待測樣品，混勻

5． 放進(jìn)37℃培養箱里孵育3分鐘（注意：不宜超過(guò)5分鐘）

6． 即刻加入xx微升  催化液（Reagent C）；同時(shí)開(kāi)啟計時(shí)器進(jìn)行計時(shí)（注意：以秒計時(shí)）

7． 傾斜離心管觀(guān)察凝塊形成，直至液體凝固；同時(shí)關(guān)閉計時(shí)器結束計時(shí)

8． 正常參考范圍：

手工操作：25至35秒

凝血儀操作：23至31秒

注意事項

1． 本產(chǎn)品為20次操作，包括標準對照測定

2． 本產(chǎn)品檢測敏感度達0.01國際單位Factor VIII含量

3． 操作時(shí)，須戴手套

4． 血液采集，避免使用肝素、EDTA、草酸抗凝管

5． 樣品避免溶血，采血避免損傷組織

6． 血漿中血小板含量大于10000/毫升，以及含有雌激素、苯妥英、沃法令、納洛酮、肝素等則干擾檢測

7． 血漿樣品避免反復凍融：4℃環(huán)境維持4小時(shí)；－20℃維持2月；－80℃維持6月

8．   標準液（Reagent D）為標準對照血漿

9． 建議用戶(hù)建立自己的正常參考值范圍

10． 用戶(hù)可以使用各種自動(dòng)和半自動(dòng)凝血儀：例如Electra 600等進(jìn)行檢測，按照儀器操作手冊操作

11． 本公司提供系列血液凝集檢測試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感