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冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒的技術(shù)背景

更新時(shí)間:2021-08-25  |  點(diǎn)擊率:612

    冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒是一種旨在使用細胞色素C催化人工電子供體染料二氨基聯(lián)苯胺的非酶源性自然氧化,形成棕褐色不溶性產(chǎn)物,以及使用合成電子受體四氮唑蘭染料,通過(guò)反應呈現出藍色沉淀現象,來(lái)分析冰凍組織樣品中細胞色素氧化酶和琥珀酸脫氫酶雙酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良傳統方法、成功實(shí)驗證明的。主要適用于冰凍動(dòng)物組織的細胞色素氧化酶和琥珀酸脫氫酶活性的定性檢測。適宜于線(xiàn)粒體疾病和肌肉分型的研究。產(chǎn)品嚴格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩定,顯色清晰。

    冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒的技術(shù)背景:

    肌肉組織細胞中含有氧化酶,包括細胞色素氧化酶、琥珀酸脫氫酶和NADH四氮唑蘭還原酶(NADH-TR)等,通過(guò)組織化學(xué)染色,可以呈現低含量(陰性染色)和高含量(深度染色)線(xiàn)粒體狀況,由此分辨肌纖維類(lèi)型和識別線(xiàn)粒體肌?。╩yopathy)。細胞色素氧化酶(Cytochromeoxidase)是氧化呼吸鏈的酶部分的總稱(chēng)。其存在于真核生物的細胞線(xiàn)粒體上,主要通過(guò)氧化磷酸化為細胞提供能量。二氨基聯(lián)苯胺(3,3’-diaminobenzidine,DAB)是人工電子供體染料,通過(guò)與金屬蛋白,例如含鐵蛋白細胞色素C中的物理性結合,產(chǎn)生非酶源性自然氧化,同時(shí)提供電子(細胞色素C作為電子受體)于呼吸鏈的電子傳遞系統,由此呈現出顏色變化和沉積,形成棕褐色不溶性產(chǎn)物。在DAB自然氧化的同時(shí),產(chǎn)生活性氧,例如過(guò)氧化氫,由過(guò)氧化氫酶防止其聚集。在大量氧化型DAB的存在下,通過(guò)細胞色素氧化酶的作用,亞鐵細胞色素C被氧化成正鐵細胞色素C。由此氧化型DAB棕褐色不溶性產(chǎn)物被用于檢測組織細胞中細胞色素氧化酶的活性。琥珀酸脫氫酶(succinnatedehydrogenase;SDH;EC1.3.99.1)是三羧酸循環(huán)(tricarboxylicacidcycle;TCA)或Krebs循環(huán)中與細胞線(xiàn)粒體膜相關(guān)的重要元素,位于線(xiàn)粒體內膜,參與細胞呼吸鏈。其功能在于催化琥珀酸(succinate)的氧化反應,產(chǎn)生延胡索酸(furmarate),通過(guò)黃素腺嘌呤二核苷酸(FlavinAdenineDinucleotide;FAD)傳遞電子?;阽晁崦摎涿傅姆磻?,使用人工電子受體染料硝基藍四氮唑(NitroBlueTetrazolium;NBT),接受來(lái)自還原型黃素腺嘌呤二核苷酸(ReducedflavinAdenineDinucleotide;FADH2)的電子,而被還原,產(chǎn)生不溶性藍色或藍黑色甲暨色素。使用雙酶染色,可以有效地篩選線(xiàn)粒體疾病和進(jìn)行肌纖維分型。
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