一、樣品準備
1．準備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定1克組織重量
2．（選擇步驟）放進(jìn)預冷的15毫升錐形離心管
3．（選擇步驟）加入xx毫升 清理液（Reagent A）清洗1次
4．即刻用刀片切碎組織
5．放進(jìn)一個(gè)預冷的15毫升錐形離心管
6．加入預冷的xx毫升 裂解液（Reagent B）
7．渦旋震蕩5秒，充分混勻
8．即刻放進(jìn)預冷的DOUNCE勻漿器，在冰槽里用研磨棒勻化組織（約80下）
9．將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管，放進(jìn)4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
10．小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個(gè)新的預冷的15毫升錐形離心管
11．（選擇步驟）如果上清液含有肉眼可見(jiàn)的殘渣，重復離心5分鐘一次，速度為5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
12．即刻移入到1.5毫升離心管
13．移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測（注意：建議使用 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－GMS30030.1）
14．放進(jìn)－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里備用
二、測讀準備
1．準備好上述制備好的樣品，置于冰槽里融化
2．設定好分光光度儀：溫度25℃，波長(cháng)550nm，間隔10秒，測讀7次（共60秒），并置零或設置0秒和60秒各測讀1次
3．將－20℃冰箱里的試劑盒中的 反應液（Reagent D）置入冰槽里融化，然后移出100微升到新的1.5毫升離心管，加入xx微升 穩定液（Reagent E），輕柔混勻后，室溫下暗室里靜置至少15分鐘（可見(jiàn)顏色變化），置于冰槽里，標記為 反應工作液（注意：參見(jiàn)注意事項5），放在暗室里
三、背景對照測定
1．移取xx微升 緩沖液（Reagent C）到新的1毫升比色皿
2．加入xx微升 稀釋液（Reagent F）
3．上下傾倒數次，混勻
4．室溫下孵育2分鐘
5．放進(jìn)分光光度儀，置零
6．取出比色皿，加入xx微升含有 反應液（Reagent D）和 穩定液（Reagent E）的 反應工作液
7．上下傾倒數次，混勻
8．即刻放進(jìn)分光光度儀檢測，此為背景空對照（0秒讀數－60秒讀數）
四、樣品測定
1．移取xx微升 緩沖液（Reagent C）到新的比色皿
2．加入100微升待測樣品（注意：建議總量50微克總蛋白，且樣品需澄清）
3．上下傾倒數次，混勻
4．室溫下孵育2分鐘
5．放進(jìn)分光光度儀，置零
6．取出比色皿，加入xx微升含有 反應液（Reagent D）和 穩定液（Reagent E）的 反應工作液
7．即刻上下傾倒數次，混勻（限定在3秒之內）
8．即刻放進(jìn)分光光度儀檢測，此為樣品讀數（0秒讀數－60秒讀數）
9．計算樣品活性
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