MB10067.4 v.A

  細胞培養液氧化應激活性氧超氧陰離子比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

（中文版）

主要用途

  細胞培養液氧化應激活性氧超氧陰離子比色法定量檢測試劑是一種旨在通過(guò)硝基藍四氮唑染料，受到超氧陰離子O₂^-的還原，產(chǎn)生不溶性藍黑*素沉淀，由分光光度儀比色分析，定量檢測細胞外超氧陰離子活性氧族的生成和增加的*而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗證明的。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、衰老、代謝和營(yíng)養學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩定，檢測敏感。

技術(shù)背景

超氧自由基陰離子（superoxide radical；O^2-）、過(guò)氧化氫（hydrogen peroxide；H₂O₂）、羥自由基或氫氧基（hydroxyl radical；OH^-）、過(guò)氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氫過(guò)氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、過(guò)氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HClO）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線(xiàn)態(tài)氧氣（singlet oxygen）等細胞內活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導致細胞衰老或凋亡。染料四氮唑蘭（tetrazolium）化合物，包括硝基藍四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT）和二甲基噻唑二苯基四唑嗅藍（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），一旦受到超氧陰離子O₂^-的直接還原，便產(chǎn)生不溶性藍黑色甲暨色素，在分光光度儀下（650nm波長(cháng)），呈現吸光峰值的變化。據此定量檢測細胞外超氧陰離子活性氧族的濃度。

產(chǎn)品內容

  染色液（Reagent A）      2毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)  1份

保存方式

保存  染色液（Reagent A）在－20℃冰箱里，嚴格避免光照；有效保證6月

用戶(hù)自備

*細胞培養液（GMS12052）：用于細胞操作所需的培養基

細胞培養箱：用于細胞染色孵育

分光光度儀或酶標儀：用于染色定量

實(shí)驗步驟

• 準備好待測的細胞培養板的培養細胞
• 分別小心按下表移取多孔細胞培養板里的培養液上清到相應的另一多孔細胞培養板（注意：避免觸及細胞）

• 加入適量的  染色液（Reagent A）到上述培養板里的每個(gè)培養孔里（見(jiàn)下表）

• 輕輕搖動(dòng)細胞培養板，混勻
• 放進(jìn)37℃細胞培養箱里孵育60分鐘
• （選擇步驟）肉眼觀(guān)察：溶液呈現藍黑色，顯示超氧陰離子濃度增強

7． 即刻放進(jìn)分光光度儀測讀，波長(cháng)為650 nm

8． 構建細胞外超氧陰離子活性氧生成曲線(xiàn)：縱座標（Y軸）為吸光值（OD）；橫坐標（X軸）為細胞數、時(shí)間點(diǎn)或藥物處理濃度等

注意事項

• 本產(chǎn)品為100次（96孔板）操作
• 細胞培養操作，須無(wú)菌狀態(tài)下進(jìn)行
• 操作時(shí)，須戴手套
• 孵育時(shí)，避免光照
• 如果超氧陰離子活性氧濃度過(guò)低，可以延長(cháng)孵育時(shí)間至4小時(shí)
• 建議96孔細胞培養板中每孔細胞密度為10⁴細胞
• 本公司提供系列活性氧檢測試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰