精漿檸檬酸定量測定對于判斷精子質(zhì)量有一定的作用。精漿檸檬酸定量試劑盒的測定原理是檸檬酸與吲哚在酸和加熱的情況下形成復合物，該復合物通過(guò)96孔板測定儀或分光光度計在470nm處測定吸光值，同時(shí)做檸檬酸的標準曲線(xiàn)，通過(guò)標準曲線(xiàn)來(lái)計算精液中檸檬酸的具體含量，即對檸檬酸進(jìn)行定量檢測。精漿檸檬酸定量試劑盒是根據Karvonen和Malm的方法進(jìn)行改良后的方法，在濃度范圍內有較好的線(xiàn)性關(guān)系。用分光光度計測定吸光值，若采用比色杯時(shí)，應按照比例調節精液和試劑的量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
自備材料：
1、1.5ml離心管
2、正向置換型加樣器
3、濃鹽酸
4、水浴鍋或恒溫箱
5、96孔板
6、酶標儀或分光光度計
操作步驟(僅供參考)：
1、制備標準曲線(xiàn)：用ddH20稀釋Citrate標準(2.24mM)。取離心管加入Citrate標準(2.24mM)和150μl ddH20混合，即獲得Citrate標準；取離心管加入Citrate標準(1.12mM)和150μl ddH20混合，即獲得濃度為0.56mM的Citrate標準，依次對倍稀釋?zhuān)謩e獲得濃度為0.28mM和0.14uM的Citrate標準。
2、制備樣本：離心精液樣本，取上層精漿置于新的離心管，儲存于-20℃待檢。
3、 樣本預處理：解凍去除精子的精漿，在混旋器上充分混勻。取若干新的離心管，每管加入ddH20，用正向置換型加樣器加入混勻好的精漿，即獲得的預處理樣本，每個(gè)精漿樣本應稀釋作為復測。
4、 樣本檢測：
① 脫蛋白：向預處理樣本中加入Protein Dilution A和B，混勻。
② 離心：室溫放置，離心。
③ 上樣：取上清置轉移至離心管中。同時(shí)取新離心管加入ddH20作為空白對照，取新的離心管分別加入Citrate標準，即濃度為2.24mM、1.12mM、0.56mM、0.28mM、0.14mM的標準品個(gè)2份。
④ 顯色反應：向每管樣本中加入Indole Developer，混勻。向每個(gè)樣本中加入濃鹽酸，封口，在通風(fēng)櫥中充分混勻，50℃水浴中加熱，混勻，冰水冷卻。
⑤ 測OD值：在通風(fēng)櫥中用正向置換型加樣器將250μl液體小心移入96孔板中，以ddH20作為空白管調節零點(diǎn)，用酶標儀或96孔讀數板在波長(cháng)下讀取結果。
計算結果：
① 做檸檬酸標準曲線(xiàn)，從標準曲線(xiàn)上讀取檸檬酸濃度。
② 乘以稀釋倍數(16倍)得到未稀釋精漿中的檸檬酸濃度(mM)。
③ 乘以1次射精的精液體積，得到每次射出的精液中檸檬酸的含量(μM)。
④ 參考值：一次射精檸檬酸濃度≥13μM。
注意事項：
1、 建議每次測定時(shí)都做標準曲線(xiàn)，以使標準更準確，另外標準品需避免反復凍融。
2、 如果沒(méi)有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但應考慮根據比色皿的小檢測體積，樣品和標準品的用量亦相應按比例放大。使用分光光度計測定蛋白濃度時(shí)，每個(gè)試劑盒可以測定的樣品數量可能會(huì )顯著(zhù)減少。
3、 所測樣本的值高于標準曲線(xiàn)的上限，應稀釋樣本后重新測定。
4、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
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