MB80070.1 v.A

 細胞衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法（SCHMORL）染色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

（中文版）

主要用途

 細胞衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法（SCHMORL）染色試劑是一種旨在使用鐵還原法技術(shù)，分析細胞樣品中晚期脂褐素沉積現象，從而在光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察到藍色表達的細胞作為細胞復制性衰老（replicative senescence）的分子特征來(lái)識別和探測衰老細胞的*而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良SCHMORL方法、成功實(shí)驗證明的。主要適用于動(dòng)物細胞的的晚期脂褐素檢測。廣泛應用于細胞生物學(xué)研究。產(chǎn)品嚴格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩定，顯色清晰。  

技術(shù)背景

細胞復制性衰老是細胞控制其生長(cháng)潛能的保障機制。衰老細胞停滯在細胞周期的G1期，表現出細胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征，其中脂褐素顆粒聚集增多成為細胞衰老的特征性生物學(xué)標記。脂褐素（lipofusin），又稱(chēng)為“磨損（wear and tear）”色素，是一種細胞內與年齡相關(guān)的棕黃色熒光胞漿顆粒色素，主要在有絲分裂后細胞的繼發(fā)性溶酶體內。脂褐素常見(jiàn)于老年人的永恒性非分裂性組織細胞里，例如心臟、肝臟和神經(jīng)等，尤其在衰老誘導的細胞退變中聚集增多，特別是萎縮的組織。脂褐素來(lái)自于氧化的蛋白和脂質(zhì)，成為細胞衰老中后期的獨立指征。脂褐素分為早期和晚期，晚期脂褐素作為較強還原性物質(zhì)，在鐵離子的存在下，使鐵*（ferricyanide）轉化為亞鐵*（ferrocyanide），產(chǎn)生不可溶性普魯士藍（Prussian blue）產(chǎn)物，顯示藍色。

產(chǎn)品內容

 清理液（Reagent A）       毫升

 固著(zhù)液（Reagent B）  毫升

 染色液（Reagent C）  毫升

 酸性液（Reagent D）  毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)     1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；  染色液（Reagent C）避免光照；有效保證3月

用戶(hù)自備

小型染色缸：用于細胞染色操作

光學(xué)顯微鏡：用于觀(guān)察染色后的細胞

實(shí)驗步驟

操作一：細胞載玻片染色

• 取出待測的細胞載玻片或細胞涂片 
• 小心加上xx微升 清理液（Reagent A）在載玻片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
• 小心移去載玻片上的 清理液（Reagent A）
• 小心加上xx微升 固著(zhù)液（Reagent B）在載玻片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心移去載玻片上的 固著(zhù)液（Reagent B）
• 小心加上xx微升 清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 在室溫下孵育2分鐘
• 小心移去載玻片上的 清理液（Reagent A）
• 小心加上xx微升 染色液（Reagent C）在載玻片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
• 在室溫下孵育10分鐘
• 小心移去載玻片上的 染色液（Reagent C）
• 小心將載玻片置入xx毫升 清理液（Reagent A）的小型染色缸里 
• 室溫下孵育2分鐘
• 取出載玻片片，小心移去載玻片上的 清理液（Reagent A）
• 小心加上xx微升 酸性液（Reagent D）在載玻片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心移去載玻片上的 酸性液（Reagent D）
• 小心加上xx微升 清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去載玻片上的 清理液（Reagent A）
• （選擇步驟）復染（建議使用 核固紅復染試劑盒——GMS40011）
• 放上蓋玻片或封片（水相或中性樹(shù)脂）
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察：脂褐素陽(yáng)性細胞呈現藍色，細胞核呈現紅色（如果復染）

操作二：24孔細胞培養板染色

• 小心抽去24孔細胞培養板里的培養液
• 每孔加入xx微升 清理液（Reagent A），清洗生長(cháng)中的細胞表面
• 小心抽去每孔里的 清理液（Reagent A）
• 每孔加入xx微升 固著(zhù)液（Reagent B），覆蓋整個(gè)生長(cháng)表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心抽去每孔里的 固著(zhù)液（Reagent B）
• 每孔加入xx微升 清理液（Reagent A），清洗細胞表面
• 在室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去 清理液（Reagent A）
• 每孔加入xx微升 染色液（Reagent C），覆蓋整個(gè)生長(cháng)表面
• 在室溫下孵育10分鐘
• 小心抽去 染色液（Reagent C）
• 每孔加入xx微升 清理液（Reagent A），清洗細胞表面
• 在室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去 清理液（Reagent A）
• 重復實(shí)驗步驟13至15二次
• 小心加上xx微升 酸性液（Reagent D），覆蓋整個(gè)生長(cháng)表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心抽去 酸性液（Reagent D）
• 小心加入xx微升 清理液（Reagent A）
• 小心抽去 清理液（Reagent A）
• （選擇步驟）復染（建議使用 核固紅復染試劑盒——GMS40011）
• 小心加入xx微升 清理液（Reagent A）
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察：脂褐素陽(yáng)性細胞呈現藍色，細胞核呈現紅色（如果復染）

注意事項

• 本產(chǎn)品為50次（細胞載玻片）和25次（1個(gè)24孔板）操作
• 本產(chǎn)品還可以染色其它還原性物質(zhì)，包括黑色素（melanin）、肝膽汁（liver bile）、腸嗜鉻細胞（enterochromaffin）等
• 操作時(shí)，須戴手套
• 使用時(shí)，避免污染母液
•  染色液（Reagent C）避免光照
• 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿(mǎn)樣品表面
• 染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀(guān)察
• 本公司提供系列細胞衰老分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著(zhù)色清晰