MB80018.2 v.A

  冰凍切片神經(jīng)纖維比耳朔夫斯基（Bielschowsky）銀染試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

（中文版）

主要用途

  冰凍切片神經(jīng)纖維比耳朔夫斯基（Bielschowsky）銀染試劑是一種旨在使用銀還原技術(shù)，分析固定處理的冰凍組織切片中神經(jīng)纖維、軸突、神經(jīng)原纖維纏結和老年斑形態(tài)學(xué)的*而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良比耳索夫斯基（Bielschowsky）方法、成功實(shí)驗證明的。主要適用于冰凍腦組織或外周神經(jīng)組織切片的相關(guān)纖維組織檢測。廣泛用于動(dòng)物腦神經(jīng)病理生理解剖學(xué)的研究。產(chǎn)品嚴格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩定，顯色清晰。

技術(shù)背景

神經(jīng)纖維對于銀離子敏感。通過(guò)嗜銀染色，神經(jīng)纖維還原離子銀為可見(jiàn)金屬銀沉積，呈現黑色。

產(chǎn)品內容

  清理液（Reagent A）  120毫升

  固著(zhù)液（Reagent B）   10毫升

  染色液（Reagent C）   20毫升

  中和液（Reagent D）   20毫升

  顯色液A（Reagent E）    5毫升

  顯色液B（Reagent F）    5毫升

  終止液（Reagent G）    5毫升

  平衡液（Reagent H）    5毫升

  補水液A（Reagent I）    5毫升

  補水液B（Reagent J）    5毫升

  凈化液（Reagent K）    5毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)    1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶(hù)自備

小型玻璃染色缸：用于冰凍切片染色操作的容器

中性樹(shù)脂：用于切片封片

光學(xué)顯微鏡：用于切片染色后觀(guān)察分析

實(shí)驗步驟

• 樣本固著(zhù)處理

• 取出待測的10微米厚的冰凍組織切片 
• 小心加上200微升  清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
• 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升  固著(zhù)液（Reagent B），鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面
• 室溫下，孵育10分鐘
• 小心移去切片上的  固著(zhù)液（Reagent B）
• 小心加上200微升  清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）
• 重復實(shí)驗步驟7至8一次

二、 樣本染色處理

• 小心加上200微升  染色液（Reagent C），鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下至少孵育15分鐘（注意：可見(jiàn)切片呈現淺棕色）
• 小心移去切片上的  染色液（Reagent C）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升  清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）
• 移取1毫升  染色液（Reagent C）到5毫升玻璃管里
• 一滴一滴（25微升一次）加入  中和液（Reagent D），直至溶液澄清，標記為  染色強化液
• 小心加上200微升上述  染色強化液，鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下至少孵育30分鐘，直至切片呈現深棕色
• 小心移去切片上的  染色強化液

三、 樣本顯色處理

• 準備1個(gè)1.5毫升離心管
• 加入100微升  顯色液A（Reagent E）和100微升  顯色液B（Reagent F），混勻，標記為  顯色工作液
• 小心加上200微升  顯色工作液在切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘，直至出現黑色為止（注意：顯微鏡下觀(guān)察后繼續下列操作）
• 即刻移去切片上的  顯色工作液
• 即刻加上100微升  終止液（Reagent G）在切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育1分鐘
• 小心移去切片上的  終止液（Reagent G）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升  清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）
• 即刻加上100微升  平衡液（Reagent H）在切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的  平衡液（Reagent H）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升  清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）
• 小心加上100微升  補水液A（Reagent I）在切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面
• 小心移去切片上的  補水液A（Reagent I）
• 小心加上100微升  補水液B（Reagent J）在切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面
• 小心移去切片上的  補水液B（Reagent J）
• 小心加上100微升  凈化液（Reagent K）在切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面
• 小心移去切片上的  凈化液（Reagent K）
• 放上蓋玻片或封片（中性樹(shù)脂）
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察：神經(jīng)纖維、軸突、神經(jīng)原纖維纏結和老年斑呈現金黑色，切片背景呈現黃色或棕色

注意事項

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 試劑具有腐蝕性，注意操作安全
• 建議使用玻璃染色缸
• 加入  中和液（Reagent D），須達到飽和狀態(tài)，臨飽和前，加10微升，混勻后可見(jiàn)黃褐色；再加10微升，混勻后澄清為止。不宜多加，如果多加，可以回加  染色液（Reagent C） 
• 每次更換試劑溶液時(shí)，保持切片面基本晾干
• 試劑溶液在切片表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿(mǎn)切片表面
• 樣品染色避免過(guò)度
• 使用  顯色工作液時(shí)，有時(shí)反應短至2至5分鐘之內，總之以出現黑色為準，通過(guò)顯微鏡觀(guān)察確定
• 染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀(guān)察 
• 樣品染色后保存，避免光照
• 本公司提供系列組織細胞神經(jīng)系統成分染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰