真菌/酵母細胞樣品細胞周期SYTOX綠色熒光流式細胞分析試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

  真菌/酵母細胞樣品細胞周期SYTOX綠色熒光流式細胞分析試劑是一種旨在通過(guò)細胞流式儀測定真菌/酵母細胞中DNA結合SYTOX綠色染料程度，來(lái)定量DNA含量，以進(jìn)一步獲取細胞周期分布狀況的*而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗證明的。其適用于各種真菌/酵母細胞，包括芽殖酵母、裂殖酵母等的細胞周期分析?？梢员挥糜诩毎蛲?、信號傳遞、細胞分裂、代謝等的研究。產(chǎn)品嚴格無(wú)菌，即到即用，分辨率高，操作簡(jiǎn)捷，性能穩定。

技術(shù)背景

芽殖酵母（Saccharomyces cerevisiae）、裂殖酵母（Schizosacchromyces pombe）是研究真核生物細胞周期的模式生物。細胞周期是評價(jià)細胞代謝、生理和病理狀況的重要指標。通過(guò)DNA結合染料，借助細胞流式儀，測定出DNA含量，根據DNA含量隨著(zhù)細胞周期的不同而發(fā)生變化，來(lái)確定和區別細胞周期的不同階段。流式細胞術(shù)（FLOW CYTOMETRY）是七十年代發(fā)展起來(lái)的集計算機、激光、流體力學(xué)、細胞化學(xué)、細胞免疫學(xué)為一體的高科學(xué)技術(shù)。凋亡細胞是在正常G0/G1峰細胞群前出現亞二倍體峰（sub-G1）細胞群。SYTOX綠色染料具有不受細胞數量變化、染料濃度變化、細胞形態(tài)和大小變化，以及細胞培養液不同等影響，且不易滲漏等優(yōu)點(diǎn)。

產(chǎn)品內容

  清理液（Reagent A）     毫升

  固著(zhù)液（Reagent B）     毫升

  抗干擾液（Reagent C）     毫升

  酶解液（Reagent D）     毫升

  染色液（Reagent E）     毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)     1份

保存方法

保存  抗干擾液（Reagent C）、  酶解液（Reagent D）和  染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；  染色液（Reagent E）避免光照，有效保證6月

用戶(hù)自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

2毫升離心管：用于細胞染色的容器

（微型）臺式離心機：用于樣品操作操作

培養箱或恒溫水槽：用于反應孵育

細胞流式儀：用于細胞熒光分析

實(shí)驗步驟

• 準備好5 X 10⁶的待測真菌/酵母細胞 
• 放進(jìn)微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升  清理液（Reagent A）到15毫升錐形離心管，混勻
• 放進(jìn)微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g 
• 小心抽去上清液
• 緩慢加入xx毫升預冷的  固著(zhù)液（Reagent B），且渦旋震蕩混勻
• 放進(jìn)4℃冰箱里孵育16小時(shí)
• 放進(jìn)微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g 
• 小心抽去固著(zhù)液
• 加入xx毫升  清理液（Reagent A）到15毫升錐形離心管，混勻
• 移入到2毫升離心管
• 放進(jìn)微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g
• 重復清洗一次
• 加入xx微升  抗干擾液（Reagent C），混勻
• 放進(jìn)37℃恒溫水槽，孵育2至16小時(shí)
• 放進(jìn)微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g
• 加入xx微升  酶解液（Reagent D），混勻
• 放進(jìn)37℃恒溫水槽，孵育20分鐘
• 放進(jìn)微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g
• 加入xx微升  清理液（Reagent A），混勻
• 放進(jìn)微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g 
• 小心抽去上清液
• 加入xx微升  染色液（Reagent D），混勻細胞顆粒群
• 超聲處理100瓦，30%功率，15秒
• 在暗室里37℃培養箱里孵育30分鐘
• 移入到細胞流式儀測試管（可放進(jìn)4℃冰箱里待測）
• 即刻進(jìn)行細胞流式儀分析：波長(cháng)488nm氬離子激光出現綠色熒光（或488nm激發(fā)波長(cháng)，530nm散發(fā)波長(cháng)），觀(guān)察50000個(gè)細胞以上

注意事項

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 孵育時(shí)，必須避免光照
• 建議細胞染色完成后，即刻進(jìn)行細胞流式儀分析。如果放進(jìn)4℃冰箱里待測，不要超過(guò)1周
• 細胞流式儀分析前，須混勻內容物，或超聲處理，避免細胞成團
• 細胞檢測量不得少于10000個(gè)
• 告知流式儀技術(shù)員有關(guān)細胞類(lèi)型
• 使用未經(jīng)染色的細胞進(jìn)行FSC與SSC設定，然后將染色細胞調整到未經(jīng)染色細胞的水平，包括FL1、FL2、FL3的PMT
• 建議設定：

Detector FSC E00  Gain：2

Detector FL1-A Voltage：400  Gain：4

流速：500/秒

• 本公司提供系列細胞周期分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰