特殊石蠟切片組織衰老特異性脂褐素靛酚原位直接染色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

（中文版）

主要用途

 特殊石蠟切片組織衰老特異性脂褐素靛酚原位直接染色試劑是一種旨在使用特殊脫蠟處理和非離子化還原性染料靛酚溶解氧化技術(shù)，分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中（zui大程度保留的）脂褐素沉積現象，從而在光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察到紅色表達的細胞作為細胞復制性衰老（replicative senescence）的分子特征來(lái)識別和探測衰老細胞的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良、成功實(shí)驗證明的。主要適用于石蠟包埋組織切片的脂褐素檢測，但不適用于人體心肌組織和小鼠腦組織的脂褐素檢測，與紅細胞產(chǎn)生不同染色。廣泛應用于細胞生物學(xué)研究。產(chǎn)品嚴格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩定，顯色清晰。  

技術(shù)背景

細胞復制性衰老是細胞控制其生長(cháng)潛能的保障機制。衰老細胞停滯在細胞周期的G1期，表現出細胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征，其中脂褐素顆粒聚集增多成為細胞衰老的特征性生物學(xué)標記。脂褐素（lipofusin），又稱(chēng)為“磨損（wear and tear）”色素，是一種細胞內與年齡相關(guān)的熒光胞漿顆粒色素，主要在有絲分裂后細胞的繼發(fā)性溶酶體內。脂褐素常見(jiàn)于老年人的永恒性非分裂性組織細胞里，例如心臟、肝臟和神經(jīng)等，尤其在衰老誘導的細胞退變中聚集增多，特別是萎縮的組織。脂褐素來(lái)自于氧化的蛋白和脂質(zhì)，成為細胞衰老中后期的獨立指征。染料二氯酚靛酚（2,6-Dichlorobenzenone-indophenol或2,6-Dichlorophenolindophenol）經(jīng)過(guò)酸化處理還原且非離子化，具有脂溶性，特異性染色組織細胞中的脂褐素，除人體心肌組織和小鼠腦組織外。同時(shí)使紅細胞呈現藍色。由于石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過(guò)程中，有機溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的脂質(zhì)成分，因此使用非二甲苯類(lèi)脫蠟，以zui大程度保護組織中的脂質(zhì)成分是二氯酚靛酚染色的關(guān)鍵。

產(chǎn)品內容

 脫蠟液（Reagent A）          50毫升

 凈化液（Reagent B）   10毫升

 清理液（Reagent C）  150毫升

 染色液（Reagent D）    5毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)           1份

保存方式

保存 染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；  染色液（Reagent D）避免光照；有效保證6月

用戶(hù)自備

烘箱：用于石蠟切片處理

小型染色缸：用于樣品操作的容器

光學(xué)顯微鏡：用于觀(guān)察染色后的組織細胞

實(shí)驗步驟

實(shí)驗開(kāi)始前，從－20℃冰箱里取出 染色液（Reagent D），在室溫下融化，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。

• 脫蠟處理

• 取出待測的6微米厚的石蠟包埋的組織切片
• 放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘
• 室溫下靜置15分鐘
• 小心加上500微升 脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的 脫蠟液（Reagent A）
• 重復實(shí)驗步驟4至6一次
• 小心加上200微升 凈化液（Reagent B）在切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的 凈化液（Reagent B）
• 小心加上200微升 清理液（Reagent C）在切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育3分鐘
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent C）

二、 樣本染色處理

• 小心加上100微升 染色液（Reagent D），鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面（注意：加入前混勻 染色液（Reagent D）；參見(jiàn)注意事項7）
• 室溫下孵育5分鐘，或直至可見(jiàn)紅色，避免光照
• 小心移去切片上的 染色液（Reagent D） 
• 室溫下，小心將切片置入50毫升 清理液（Reagent C）中5次（2秒/次）（注意：參見(jiàn)注意事項8）
• 輕輕移去切片上的 清理液（Reagent C） 
• 放上蓋玻片或封片（水相或中性樹(shù)脂）（注意：參見(jiàn)注意事項9）
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察：脂褐素陽(yáng)性細胞呈現紅色，非脂褐素細胞呈現無(wú)色、藍色或淡粉紅色，紅細胞呈現藍色

注意事項

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 本產(chǎn)品不適合人體心肌組織和小鼠腦組織染色
• 本產(chǎn)品適合于含有紅細胞的樣本
• 建議用戶(hù)避免使用常規石蠟包埋組織切片，即石蠟包埋前避免二甲苯等透明處理
• 使用時(shí)，避免污染母液
•  染色液（Reagent D）避免光照；由于溶液較酸，操作時(shí)注意安全
• 染色后清洗不宜過(guò)久，否則容易褪色
• 封片處理忌用極性脂類(lèi)溶劑，例如乙醇等，否則會(huì )去除色素
• 染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀(guān)察，放置過(guò)久，染色會(huì )出現褪色
• 本公司提供系列細胞衰老分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著(zhù)色清晰